Dialnet-EncuestaExploratoriaDeInfeccionPorBrucellaCanisEnP-3232071.pdf

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Rev.MVZ Córdoba 14(2):1690-1696, 2009 ORIGINAL ENCUESTA EXPLORATORIA DE INFECCIÓN POR Brucella canis EN PERROS DE VILLAVICENCIO-COLOMBIA EXPLORATORY SURVEY OF BRUCELLA CANIS INFECTION IN DOGS FROM VILLAVICENCIO-COLOMBIA Ana Pardo D, 1 MVZ, Carlos Pérez A, 1 MVZ , Agustín Góngora O, * 2 Dr. Sci, Luz Gómez L, 3 Bacterióloga; Alexander More
  1690 ENCUESTA EXPLORATORIA DE INFECCIÓN POR  Brucella canis   EN PERROS DEVILLAVICENCIO-COLOMBIA EXPLORATORY SURVEY OF BRUCELLA CANIS   INFECTION INDOGS FROM VILLAVICENCIO-COLOMBIA Ana Pardo D, 1 MVZ, Carlos Pérez A, 1 MVZ   , Agustín Góngora O, * 2  Dr. Sci, LuzGómez L, 3 Bacterióloga; Alexander Moreno V, 3 MVZ . 1 Ejercicio particular. 2  Universidad de los Llanos, Escuela de Ciencias Animales, Grupo deInvestigación en Reproducción y Genética Animal – GIRGA. Villavicencio, Colombia. 3 Universidad de los Llanos, Escuela de Ciencias Animales. *Correspondencia:agongora@unillanos.edu.co Recibido: Marzo 25 de 2009; Aceptado: Julio 15 de 2009. ORIGINAL Rev.MVZ Córdoba 14(2):1690-1696, 2009 RESUMEN Objetivo.  Determinar la presencia de anticuerpos a B. canis  en perros domésticos y callejerosdel municipio de Villavicencio, Colombia. Materiales y métodos. Se utilizó la   prueba deaglutinación rápida en placa con antígeno menos mucoide (M-) en 201 muestras de suero.En dos animales seropositivos se realizó intento de aislamiento por hemocultivo en medioselectivo para Brucella (oxoid®). En un animal seropositivo, con crecimiento bacteriano concaracterísticas morfológicas sugestivas a B. canis  se realizó histopatología de testículo,bazo e hígado. Resultados.  La seropositividad general fue de 1.49% y correspondió a trescaninos machos, dos de los cuales presentaron signos clínicos de epididimitis y orquitis(unilateral). El cultivo y la histopatología no fueron concluyentes para el diagnostico de B.canis . Conclusiones.  La seropositividad fue baja y sugiere que la población estudiada no haestado en contacto con la bacteria. La presencia de reactores puede estar asociado confalsos positivos. El no aislamiento de la bacteria no indica que la enfermedad no exista por loque se requiere de nuevos estudios. Palabras clave : Brucelosis, Brucela canis , serodiagnóstico, Colombia.  ABSTRACT Objective.  To estbalish the presence of B. canis  antibodies in domestic and street dogs inVillavicencio, Meta, Colombia. Materials and methods. 201 dog sera samples were analizedby rapid plate agglutination test with mucoid (M-) antigen. Isolation by haemoculture inbrucella selective medium (Oxoid ® ) was attempted in two seropositive animals. Histopathologyof the testicle, spleen and liver were carried out on a seropositive animal having bacterialgrowth with morphological characteristics suggestive of B. canis . Results.  Generalseropositivity was 1.49% and corresponded to three male dogs, two of them presentedclinical signs of unilateral epididymitis and orchitis. Culture and histopathology were unableto diagnosis B. canis . Conclusions.  Seropositivity was low and suggested that the populationbeing studied had not been in contact with the bacteria. The presence of reactors couldhave been associated with false positives. The failure to isolate bacteria did not indicatethat the disease does not exist, therefore, new studies are needed. Key words : Brucellosis, Brucella canis, serodiadnosis, Colombia. INTRODUCCIÓN La Brucelosis canina es una enfermedad decarácter zoonótico de presentación clínicao subclínica que ocasiona aborto en lashembras caninas especialmente entre los 45-55 días de la gestación. En los machos, laslesiones características corresponden adermatitis escrotal, epididimitis, orquitis unio bilateral, discoespondilitis y degeneracióntesticular (1). La transmisión de la bacteriaes esencialmente venérea, aunque puedenexistir otras vías de infección por estrechocontacto con animales infectados (2).Los caninos se pueden infectar por cuatrode las seis especies de Brucella  que hastahace poco se habían identificado ( Brucellaabortus, Brucella melitensis, Brucella suis y Brucella canis), aunque no se hancomprobado las infecciones por Brucella ovis y Brucella neotomae  (2). Recientemente, elComité Internacional de Sistemática deProcariotes, subcomité de taxonomía de Brucella  incluyó tres nuevas especies, Brucella ceti, Brucella pinnipedialis y Brucellanicroti   (3) que por ser recientementedescubiertas, no se tiene mayor información.Las fuentes de infección de la B. canis  parael humano son el contacto con fetosabortados y las secreciones vaginales oprepuciales, aunque el cuadro clínico es demenor gravedad que el ocasionado por lasotras especies de Brucella (2). En los paísesen donde la prevalencia de la brucelosis esalta, la transmisión al humano ocurre conmenor frecuencia (4).El diagnostico definitivo de B. canis  en loshumanos y los caninos es el cultivo, sinembargo, es difícil de realizar ya que labacteria se elimina intermitentemente y nosiempre se obtienen resultados (4), por talrazón se utilizan las pruebas serológicas,siendo una de las más utilizadas laaglutinación rápida en placa con o sin adiciónde 2 mercaptoetanol que utiliza una cepamenos mucoide (M-) de B. canis  que reduceel número de reacciones cruzadas (5).La brucelosis canina se ha convertido en unserio problema de salud pública en diversospaíses y ciudades del mundo, por la altapoblación de animales abandonados, loscuales conforman colonias y deambulanlibremente sin control sanitario. Laenfermedad se ha reportado en Canadá (6),Sur de los Estados Unidos (7), México (8),España (9) Alemania (10), Polonia (11),República Checa (12) e Italia (13).Igualmente, en asia como en la India (14),Filipinas (15), Corea (16), China (17), Japón(18), Turquía (19), Malasia (20), Taiwan (21) 1691Pardo - Encuesta exploratoria de infección por Brucella canis  1692REVISTA MVZ CÓRDOBA ã Volumen 14(2), Mayo - Agosto 2009 y Nigeria (22). En Suramérica, Brasil (23),Argentina (24) y Chile (25).En Colombia la Brucelosis canina eradesconocida, aunque se había reportadoevidencia serológica (26,27) no se habíaaislado la bacteria como una pruebadefinitiva de la existencia en el país. EnArgentina en el 2005, se reportó el primeraislamiento en un criadero comercial enanimales importados de los Estados Unidos,el cual fue tipificado por la AdministraciónNacional de Laboratorios e Institutos deSalud (ANLIS) Dr.Carlos Malbran   BuenosAires Argentina (28).Con el antecedente descrito, surgió lanecesidad de conocer la posible existenciade la enfermedad en otras ciudades,diferentes al lugar en donde se reportópor primera vez, dada la permanentemovilización de animales por el país.Actualmente, la industria canina viene enconstante crecimiento favorecido por losaltos precios que alcanzan algunas razasespecialmente aquellas utilizadas comoanimales de compañía o guardianes. EnVillavicencio al igual que en otras ciudades,se realizan eventos feriales que reunen unalto número de animales, en donde seconvienen cruzamientos, sin que medienrestricciones sanitarias frente a estaenfermedad.El objetivo de este estudio fue determinarla reactividad serológica a B. canis  enperros domésticos y callejeros deVillavicencio e intentar en los animalesseropositivos el aislamiento de la bacteria. MATERIALES Y MÉTODOS Animales y obtención de muestras. Setomaron muestras de sangre (n:201)caninos de una población total aproximadade 40.000 animales (Comunicación personalSecretaría de Salud Municipal deVillavicencio), 101 muestrascorrespondieron a animales de compañíaque habían sido remitidos a consultoriosparticulares y que al examen clínico habíanpresentado por lo menos un signo clínicocompatible con brucelosis canina. Lasotras 100 muestras correspondieron aanimales recogidos de la ciudad ytrasladados a un albergue municipal.Ambos grupos fueron sometidos a unexamen clínico y se obtuvo informaciónsobre edad y sexo.De cada animal se obtuvoaproximadamente 5.0 ml de sangre porpunción yugular en tubos estériles alvacio sin anticoagulante (vacutainer®).Después de una hora de su obtención secentrifugaron a 3500 rpm durante 5minutos y el suero extraído fue fraccionadoen alícuotas de 1.0 ml. Los suerospermanecieron congelados a –70°C hastasu uso. Prueba de aglutinación rápida conantígeno (M-). Se realizó en elLaboratorio de Fisiología y Biotecnologíade la Reproducción de la Facultad deCiencias Agrarias de la Universidad deAntioquia, siguiendo la técnica descrita porCarmichael y Joubert (6). Brevemente, enuna lámina de vidrio se colocaron 25 mLde la muestra problema en el centro de lacuadrícula, se adicionaron 25 mL de unasolución de 2-mercaptoetanol, luego seagregaron 50 mL de antígeno para pruebade aglutinación rápida en placa (PARP)convenientemente homogeneizado y atemperatura ambiente. Se homogenizó enforma individual cada muestra con unpalillo de madera cambiando cada vez yen forma giratoria la placa. Se colocó laplaca en un aglutinoscopio y después de2 minutos se realizó la lectura. El criteriopara un diagnóstico positivo fue laaparición de aglutinación (presencia degrumos), en caso contrario se considerónegativa. Cultivo. Se realizaron 3 cultivos seriadoscon intervalo de una semana en losanimales seropositivos a partir de sangreperiférica, la cual fue inoculada en medioselectivo para Brucela suplementado consuero equino al 10% (Oxoid ®). Se observóel crecimiento de colonias por 8 días,tiempo del cual, la no presencia fueconsiderado como negativo. Histopatología. Se realizó eutanasia  (Eutanex®) en un animal seropositivo porla prueba de aglutinación con antígeno M-el cual a la vez se había obtenido un cultivosospechoso a B canis . Se tomaronmuestras de riñón, testículo, e hígado quefueron fijadas en formalina buferada al10%. RESULTADOS La reactividad serológica general fue de1.49% a la prueba de aglutinación conantígeno M- y correspondió a tres caninos,uno de raza bóxer de cuatro años de edad,otro de raza Beaggle de 5 años y otro deraza criolla de 3 años, éste animal seclasificó en la categoría de callejero. Lareactividad serológica en los perrosdomésticos fue de 1.98% (2/101) y 1%(1/100) en los callejeros.En el canino de la raza Beaggle se obtuvodespués de un segundo hemocultivo elcrecimiento de colonias con característicasmorfológicas sospechosas a Brucela .  Serealizó coloración de Gram y pruebasbioquímicas a la cepa aislada teniendocomo control positivo una cepa de Brucellacanis  M- como referencia. La cepa aisladacorrespondió a bacilos Gram negativosmientras la cepa de referencia acocobacilos Gram negativos. Igualmentese observaron diferencias en las pruebasde urea y catalasa, siendo urea negativay catalasa débilmente positiva, mientrasla cepa de referencia fue urea positiva enmenos de 1 min y catalasa negativa.Después de un repique en agar Mc Conkeyse observó abundante crecimiento conpresencia de colonias compatibles conbacilos Gram negativos no fermentadores,mientras de la cepa de referencia seobtuvo escaso crecimiento.Los resultados histopatológicos revelarona nivel de bazo moderados a severoscambios depléticos de áreas T y B, conmarcada infiltración plasmocitaria. En riñónse observó focos de nefritis intersticiallinfoplasmocitaria en el área cortical ymedular, en hígado hepatitis portal yperiportal con infiltrado linfoplasmocitarioy dilatación de sinusoides. En testículo nose observaron lesiones microscópicas. DISCUSIÓN La seropositividad de anticuerpos a B. canis (1.49%) obtenido en este estudio es baja ymenor (3.2%) a la obtenida por Ulloa yHernández (26) en perros de la ciudad deBogotá en 1978. En contraste existió unmayor número de reactores en Medellín enun estudio en 157 animales, de los cuales27 (17.20%) fueron seropositivos, en 4animales se aislaron bacterias Gramnegativas con patrón bioquímicopresuntivo con B. canis , que fueronposteriormente tipificadas en un laboratoriode referencia (28).La alta seropositividad en este estudio, fueexplicada por la procedencia de los animalesde un criadero comercial, en donde existíauna alta interacción entre la población y portanto, un importante factor de riesgo paraadquirir la infección. Simultáneamente a esteestudio, se reportó en Colombia el primercaso de trasmisión de Brucella canis  a unhumano que no presentaba sintomatologíaclínica, pero que mantenía estrechocontacto con los animales infectados. Esteaislamiento fue tipificado por laAdministración Nacional de Laboratorios eInstitutos de Salud (ANLIS) Dr.CarlosMalbran Buenos Aires Argentina (28).Aunque en este estudio se aisló una bacteriamorfológicamente compatible con Brucela,en uno de los animales seropositivos, lamorfología y patrón bioquímico no fueronconsistentes con Brucella canis , hecho quese ve apoyado por los hallazgoshistopatológicos.Es posible que la reactividad serológica entres de los animales encuestados puedaser el resultado de falsos positivos, debidoa reacciones cruzadas con cepas mucoidesde Pseudomona , Bordetella bronchiseptica , Streptococus  y Staphylococus  (1). La noobtención del aislamiento, no indica quela bacteria no estuviera presente, lo cualsugiere nuevos estudios en animalesseropositivos. 1693Pardo - Encuesta exploratoria de infección por Brucella canis
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